人髓過氧化物酶（MPO）ELISA試劑盒使用說明書

藥品名稱：

通用名：人髓過氧化物酶（MPO）酶聯免疫分析試劑盒

英文名：Human  MPO  ELISA  Kit

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿、或相關組織液中髓過氧化物酶（MPO）的含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人髓過氧化物酶（MPO）水平。用純化的人髓過氧化物酶（MPO）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入髓過氧化物酶（MPO），再與HRP標記的羊抗人抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的髓過氧化物酶（MPO）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人髓過氧化物酶（MPO）的含量。

試劑盒組成

標本處理及要求

1．血清、血漿標本可直接測定；

2．組織：取相關組織1g 于5ml PBS中勻漿，室溫孵育5小時（期間不時旋渦混合）后，2000-3000轉/分離心10分鐘后，取上清液待測。

3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

4．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

操作步驟

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10孔，在、第二孔中分別加標準品100μl，然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為 600          U/L，400 U/L ，200 U/L，100 U/L，50 U/L）。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。